대장균 Glutathione Synthetase 유전자의 Fusion

Glutathione은 glutamate, cysteine, glycine으로 구성된 tripeptide로 모든 세포에서 존재한다. 이 glutathione 생합성 과정 중에 ATP의 존재하에서 r-glutamylcysteine과 glycine의 condensation을 촉매하는 효소가 glutathione synthetase이다. Glutathione synthetase 유전자의 발현을 측정하기 위해 fusion vector pMC1403에 대장균 gshB 유전자의 promoter와 일부 N-terminal을 포함하는 부위를 fusion시킨 재조합 DNA pLP1을 이용하여, gshB의 발현조절에 관한 연구를 수행하였다. 여기서 fused DNA pLP1을 PstI, SacI과 EcoRI, SacI으로 각각 double digestion하여 1.2 ％ agarose gel 전기영동하여 확인하였다. 결과 fused DNA pLP1 크기는 10.27 Kb 정도임을 알았다. 또한 glutathione synthetase(gshB)의 발현정도를 알아보기위해 fused DNA pLP1의 β-galactosidase의 활성을 측정하였다. β-galactosidase의 활성 측정하기 위해 Miller assay와 protein assay(Lowry method)가 이용되었다. fused DNA pLP1의 β-galactosidase의 활성은 다소 높게 나타났다. 하지만 다른 stress에 의한 β-galactosidase 활성에는 영향을 거의 미치지 않는 것을 확인했다.