분열효모 CCT4 유전자의 클로닝, 발현 및 성질

이 연구는 fission yeast인 Schizosaccharomyces pombe에서 CCT4라고 알려진 chaperonin의 기능을 알아보기 위해 수행하였다. t-complex polypeptide 1 (TCP-1)family 중 하나인 CCT4를 encoding하는 structural gene을 fission yeast의 genomic DNA로부터 증폭하여 shuttle vector인 pRS316에 삽입하여 recombinant plasmid pMS87을 만들었다. 확인된 CCT4 DNA의 크기는 2182 bp로서 56,968 Da의 527개의 아미노산 서열을 암호화한다. CCT4의 아미노산 서열은 Saccharomyces cerevisiae의 Cct4p, Aspergillus oryzae와 Aspergillus niger의 대응유전자와 높은 상동성을 보인다. DNA 서열은 또한 308 bp의 upstream region과 676 bp의 downstream region으로 나뉘어져 있다. CCT4 mRNA level은 plasmid pMS87을 가진 S. pombe 세포에서 현저하게 증가하였다. pRS316 또는 pMS87을 포함하는 S. pombe KP1 세포을 이용하여 다양한 스트레스 하에서 CCT4의 생리적 기능과 조절 양상을 측정하였다.