Nitric Oxide(NO)는 신경 전달 물질로 작용할 뿐만 아니라, 과생성되면 신경 유독 물질로 작용하는 것으로 보고되었다. 본 연구는 photorefractive keratectomy(PRK) 후 각막에서 NO의 신경독성을 알아보고자 하였다. 가토에서 PRK 후 시간 경과에 따라 눈물을 미세 모세관(microcapillaray tubes)으로 채취하여 NO 생성량을 측정하고, 각막지각도검사는 각막지각계(Cochet-Bonnet esthesiometer)를 이용하여 측정하였다. NO 합성제(Nitric oxide synthase, 이하 NOS라 함)의 표현을 알아보기 위하여 면역 조직화학 염색을 Spraque-Dawley albino 쥐 안구 조직의 동결 절편에 시행하였으며, 가토각막에서 Western 블롯 분석을 하여 NO의 강력한 산화제인 peroxynitrite 형성을 알아보았다. NO 생성은 정상군(Mean: 0.30±uM/㎍)과 비교할 때 PRK 후 점점 증가하여 96시간 이후에 최대값(0.69±0.22uM/㎍)을 가지고, 비유발성 NOS(constitutive NOS, 이하 cNOS라 함) 및 유발성 NOS(inducible NOS, 이하 iNOS라 함)의 경쟁적 억제제인 L-NAME(N-nitro-L-arginine methyl ester)을 국소 점안한 군에서는 NO 생성이 증가하지 않았다. 각막지각도는 PRK 후 3일경부터 시술 전 이하 수준으로 감소하였으나, L-MANE으로 처치한 군에서는 시술 전 이하로 감소하지 않았다. 본 저자들은 매우 강한 iNOS와 cNOS의 한 종류인 bNOS의 면역 반응이 각막 간질세포(keratocyte)에서 일어남과 Western 블롯 분석에서 생체 내 peroxynitrite 독성을 나타내는 것으로 여겨지는 nitrotyrosine 단백 띠를 확인하였다. 본 연구의 결과 PRK 후 생성된 NO가 각막지각도를 감소시키고, 또한 NO 합성 억제제의 국소 점안하면 각막 지각을 유지하는데 효과적인 것으로 생각된다(한안지 40:688~698, 1999).
The aim of this study was to evaluate neurotoxicity of Nitric oxide(NO) on cornea after excimer laser photorefractive keratectomy(PRK). PRK was performed on rabbit eyes. According to the time table, tear samples were collected with microcapillary tubes and corneal sensitivity was measured with a Cochet-Bonnet esthesiometer. NO generation in the tear fluid was analyzed. To demonstrate NO Synthase(NOS), immunohistochemical localization was performed on frozen sections from rat eyeball tissue. Western blot, analysis was used for detection of peroxynitrite, powerful oxidant of NO. NO generation was increased and reached to a maximum value(0.69±0.22uM/㎍) after 96 hours of PRK, as compared with in normal subjects(Mean: 0.30±0.08uM/㎍) and was not increased in the treated group with topical application of N-nitro-L-arginine methyl ester(L-NAME), a competitive inhibitor of constitutive NOS(cNOS) and inducible NOS(iNOS). Corneal sensitivity decreased below pretreatment levels after three postoperative firmed that a very strong iNOS and bNOS immunoreactivity was present in corneal keratocytes. Western blot analysis identified the bands of nitrotyrosine-proteins suggesting in vivo peroxynitrite toxicity. Our results suggested that NO generated from the enzyme after PRK decreased corneal sensitibity by damaging corneal sensory nerve though the NO and its oxidant peroxitrite. Therefore topical application of a NOS inhibitor may be effective in maintaining corneal sensitivity(J Korean Ophthalmol Soc 40:688~698, 1999).
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