사람 피부에서 특정한 keratin 표지자들은 각각 정상적인 분화와 병적인 상태를 반영한다. 본 실험에서는 12-Otetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA)에 노출된 HaCaT 세포들의 형태학적인 소견들과 함께 피부의 정상적인 분화표지자인 keratin 10 (K10), 병적인 분화표지자들인 keratin 8 (K8)과 keratin 13 (K13)의 발현양상을 밝히고자 하였다. 이를 위해 다양한 농도(0, 0.1, 1 μg/ml)의 TPA를 이 세포들에 2시간 또는 6시간동안 처리하였다. TPA에 의해 다각형의 HaCaT 세포들은 섬유모세포의 형태로 변화하였다. 핵막의 심한 접힘이 나타났고, 부착반의 수는 감소하였다. 간접면역형광법과 Northern blotting의 소견에서 TPA는 각각 단백질과 mRNA 수준에서 K10의 발현을 모두 감 소시켰지만, K8과 K13의 발현은 상당히 증가되었다. 유세포분석에서 keratin과 DNA의 양을 동시에 측정하였는데, K8과 K13의 발현이 S-G2-M기에서도 현격히 증가되었다. 결론적으로 TPA에 의해 유발된 위의 결과들은 HaCaT 세포에서의 형태학적인 변화와 keratin의 발현 사이에 밀접한 관 계가 있을 가능성을 제시하였다. 또한 피부에서 종양촉진자인 TPA가 종양개시자의 도움없이 직접적으로 악성세포를 유발 시킬 수도 있을 것으로 생각된다.
In human skin, specific keratin markers reflect on normal differentiation and pathologic conditions. This experiment focused on the expressional pattern of keratin 10 (K10: normal differentiation marker), and keratin 8 & 13 (K8 & K13: pathologic differentiation marker) together with their cellular localization after treating HaCaT cells with 12-Otetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA). The cells were treated with TPA at 0, 0.1, 1 μg/ml for 2 hours or 6 hours. Morphologic studies revealed that TPA treatment changed the shape of cells into the fibroblast-like cells with highly folded nuclear membrane and reduced number of the desmosome. The results of indirect immunofluorescent staining and Northern blotting analysis showed that TPA considerably down-regulated the expression of K10, while markedly up-regulating the expression of K8 and K13 both at protein and mRNA levels. Furthermore, by simultaneous staining for keratins and DNA content in flow cytometry, it was found that TPA increased the expression of K8 and K13 dramatically at the S-G2-M phase of the cells. In conclusion, these changes induced by TPA in HaCaT cells may indicate a close relationship between the morphologic change and the altered expression of keratin subfamilies. It also suggests that TPA known as a tumor promotor may directly induce the potentially malignant cells even without the support of tumor initiator.
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