In vitro실험계에서 tritium-label된 norepinephrine ([3H]-NE)을 PC12세포에 incorporation시킨 후에 60mM의 고농도의 K+의 자극에 의해서 탈분극 후에 세포 외로 방출되는 [3H]-NE의 양을 scintillation countering하여 정량하는 독특한 실험계를 수립하였다. 이 조절성 분비 실험계에서, 미생물대사 산물로부터 신경전달물질의 방출에 영향을 미치는 생리활성물질을 탐색하기 위하여, 곰팡이, 방선균과 박테리아의 대사산물 1만 1,000여 샘플을 탐색한 결과, PC12세포에서 고농도의 K+의 자극에 의해서 탈분극 후에 유도되는 [3H]-NE의 방출을 효과적으로 저해하는 FS390을 방선균 유래의 대사산물로부터 얻었다. PC12세포와 rat cortical neurons에서 FS390은 고농도의 K+의 자극에 의한 탈분극 후에 유도되는 신경전달물질로서 ATP의 방출에도 유의한 저해 효과를 나타냈다. PC12세포에서 저해 효과는 ionopore로 알려진 ionomycin (1 μM)을 포함하는 저농도의 K+의 완충액을 처리하였을 때에도 보여졌다. 이들 결과로부터 FS390의 신경전달 물질의 방출에 대한 저해작용은 세포내 Ca2+ 유입 이후의 반응으로 추정되며 이 신경전달물질의 방출기구에 대한 해석을 위하여 FS390물질에 대한 정제 및 구조해석을 시도하였다.
We established an in vitro experimental system using the following procedure. We first introduced tritium-labeled norepinephrine ([3H]-NE) into PC12 cells. The [3H]-NE incorporated-PC12 cells were stimulated by a high concentration (60 mM) of K+ buffer during 12 minutes. Then, we collected 100 μL supernatant and counted the amount of [3H]-NE release from PC12 cells with a scintillation counter. After screening fungal, Streptomyces spp. or bacterial product using this experimental sytem, we obtained FS390 from Streptomyces spp. which inhibited [3H]-NE release from PC12 cells. FS390 also inhibits the release of ATP as a neurotransmitter of PC12 cells and rat cortical neurons. The inhibitory effect was seen even when the PC12 cells were treated with low K+ buffer containing ionomycin (1 μM) as an ionopore. This result suggests that the inhibitory action of FS390 on neurotransmitter release appeared after the influx of Ca2+.
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