말초혈액 내 림프구의 방사선에 의한 아포프토시스

Radiation-Induced Apoptosis of Lymphocytes in Peripheral Blood

목 적 : 방사선에 의해 유도되는 림프구의 아포프토시스를 정상 성인의 말초 혈액에서 유세포계측검사로 측정할 때 소량의 혈액으로도 검사가 가능한가를 알아보고 선량 증가와 방사선조사 후 시간 경과에 따른 반응 정도를 알아보고자 본 연구를 시행하였다. 대상 및 방법 : 건강한 성인 남녀 11명을 연구 대상으로 하여 말초혈액 10 mL에서 림프구를 분리하고 이를 각각 15개로 나누어서 실험하였다. 선형가속기를 이용하여 0.5, 1, 2, 5 Gy의 방사선을 조사한 후 24, 48, 72시간 동안 배양하였다. 림프구의 아포프토시스를 정량적으로 측정하기 위해 유세포계측검사를 시행하였으며, 별도로 DNA fragmentation assay와 전자현미경검사를 이용하여 아포프토시스 소견을 추가로 관찰하였다. 결 과 : 방사선을 조사하지 않았을 때의 자발성 아포프토시스율(%)은 배양 후 24, 48, 72시간이 경과함에 따라 증가하는 소견을 보였다(1.761±0.161, 3.563±0.564, 11.098±2.849). 또한 0.5, 1, 2, 5 Gy의 방사선을 조사하여 24, 48, 72시간 동안 배양한 후 측정한 아포프토시스율(%)은 선량 증가와 방사선조사 후 시간 경과에 따라 점차 증가하였다. 방사선조사 후 24시간 후에 0.5~1, 1~2, 2~5 Gy구간의 아포프토시스율의 증가는 비교적 저 선량 영역인 0.5~1, 1~2 Gy에서 2~5 Gy 구간보다 더 큰 기울기를 보였고, 48, 72시간 후에도 0.5~1 Gy구간에서 가장 큰 기울기를 보였다. 결 론 : 유세포계측검사는 10 mL의 혈액으로 15개의 검사 결과를 낼 수 있었으므로 한 검사당 1 mL 미만의 혈액으로도 충분히 검사할 수 있겠으며, 방사선량 증가에 따라 반응의 정도도 증가하였으며, 아포프토시스 관찰 시기는 혈액 채취 후 24시간이나 48시간 후가 적절하다고 사료된다

Purpose : This study quantitatively evaluated the apoptosis in human peripheral blood lymphocytes using flow cytometry, and investigated the possibility of using the method, with a small amount of blood, and the time and dose dependence of radiation-induced apoptosis. Materials and methods : Peripheral blood lymphocytes were isolated from the heparinized venous blood of 11 healthy volunteers, 8 men and 3 women, with each 10 ml blood being divided into 15 samples. The blood lymphocytes were irradiated using a linear accelerator at a dose rate of 2.4 Gy/min, to deliver doses of 0.5, 1, 2 and 5 Gy. The control samples, and irradiated cells, were maintained in culture medium for 24, 48 and 72 hours following the irradiation. The number of apoptotic cells after the in vitro X-irradiation was measured by flow cytometry after incubation periods of 24, 48 and 72 hours. We also observed the apoptotic cells using a DNA fragmentation assay and electron microscopy. Results : The rate of spontaneous apoptosis increased in relation to the time interval following irradiation (1.761±0.161, 3.563±0.564, 11.098±2.849, at 24, 48, and 72 hours). The apoptotic cells also increased in the samples irradiated with 0.5, 1, 2 and 5 Gy, in a radiation dose and time interval after irradiation manner, with the apoptosis being too great at 72 hours after irradiation. The dose-response curves were characterized by an initial steep increase in the number of apoptotic cells for irradiation doses below 2 Gy, with a flattening of the curves as the dose approached towards 5 Gy. Conclusion : The flow cytometric assay technique yielded adequate data, and required less than 1 mL of blood. The time and dose dependence of the radiation-induced apoptosis, was also shown. It is suggested that the adequate time interval required for the evaluation of apoptosis would be 24 to 48 hours after blood sampling.