본 연구는 apoptotic 세포의 당 특이성이 큰포식세포에 의한 포식작용과 관련성이 있는지를 조사하기 위하여 수행하였다. 어린 흰쥐의 가슴샘에서 가슴샘세포를 분리하였고, 배속공간에서 큰포식세포를 분리하였다. 분리된 가슴샘세포에 apoptosis 를 유발시키기 위하여 dexamethasone을 처리하였다. TUNEL 방법으로 apoptotic 가슴샘세포를 확인한 후, 9가지 렉틴 (PSA, UEA I, GSL I B4, ECL, DBA, SBA, DSL, GSL II 및 WGA)을 이용하여 apoptotic 가슴샘세포의 당 특이성을 조사하였다. 그리고 렉틴 저해당들을 이용한 포식작용 실험을 수행하였다. TUNEL 방법을 통하여 10-6 M의 dexamethasone을 6시간 처리한 가슴샘세포에서 가장 많은 수의 apoptotic 가슴샘세포들을 관찰할 수 있었다. 렉틴 조직화학법을 통하여 apoptotic 가슴샘세포들은 PSA, UEA I, SBA, DSL 및 WGA에서 양성반응을 나타내어 apoptotic 가슴샘세포들은 α-D-mannose, α-L-fucose, terminal β-N-acetyl-D-galactosamine 및 internal β-1, 4-Nacetyl-D-glucosamine oligomers 성분의 당잔기를 가지고 있음을 알 수 있었다. 배양한 가슴샘세포와 큰포식세포를 이용하여 포식작용 실험을 수행한 결과 TUNEL 반응에 양성반응을 보인 apoptotic 가슴샘세포들이 큰포식세포에 의해 포식되었다. 배양한 가슴샘세포와 큰포식세포에 렉틴 저해당들을 처리하였을 때 큰포식세포의 포식작용이 methyl-α-mannopyranoside와 α-L-fucose에 의해 감소됨을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과들을 종합해 볼 때 큰포식세포에 의한 apoptotic 가슴샘세포의 인식에 mannose와 fucose 성분이 중요한 역할을 할 것이라고 추측된다.
The present study was carried out to investigate the correlation with the sugar specificity of the apoptotic cells and the phagocytosis of the macrophage. Young rat thymocytes were isolated from the thymus and macrophages were isolated from the peritoneal cavity. Isolated thymocytes were treated with dexamethasone to induce apoptosis. After identified the apoptotic cells by TUNEL method, nine kinds of lectins (PSA, UEA I, GSL I B4, ECL, DBA, SBA, DSL, GSL II or WGA) were used to investigate the sugar specificity of the apoptotic thymocyte. And we carried out the phagocytosis assay using the lectin-inhibitory sugars. By TUNEL method, the most numbers of apoptotic thymocytes were observed in the cultured thymocytes treated with 10-6 M of dexamethasone for 6 hours. From lectin histochemistry, apoptotic thymocyte showed positive reaction with PSA, UEA I, SBA, DSL and WGA, which indicate apoptotic cells have the sugar residues of α-D-mannose, α-L-fucose, terminal β-N-acetylgalactosamine and internal β-1, 4-N-acetylglucosamine oligomers. From phagocytosis assay using cultured thymocytes and macrophages, apoptotic thymocytes of positive reaction with TUNEL method were phagocytosed by macrophage. When the apoptotic thymocytes treated with the lectin-inhibitory sugars were mixed with the macrophages, it was observed that the phagocytosis of macrophages was reduced by methyl-α-mannopyranoside and α-L-fucose. Considering overall results, it can be assumed that the mannose and fucose may play an important role in the recognition of apoptotic thymocytes by macrophages.
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