정상쥐에서의 Nip2의 mRNA의 발현여부를 생후발육기에서 고령쥐에 걸쳐 실험하였으며, 중대뇌동맥폐색 후에 시간 별 로 해마에서의 Nip2의 mRNA의 변화를 관찰하고, Nip2와 아포토시스와 뇌허혈 정도와의 관계를 연구하였다. 실험동물로는 쥐 F344를 사용하였으며, Nip2 mRNA의 발현을 관찰하기 위하여 quantitative RT-PCR 방법을 사용하였으며, DNA fragmentation을 알기 위하여 TUNEL 염색을 시행하였다. 뇌경색의 유발부위를 판정하기 위하여 TTC 염색을 하였다. 1. 생후 발육기와 노화된 쥐에서 Nip2 mRNA가 증가되는 것을 보였다. 2. 허혈유발 해마에서 재관류 후 3시간 군에서는 Nip2가 두드러지게 발현되며, 6시간에 가장 Nip2 mRNA 의 발현이 높 음을 알 수 있었고 이는 점차적으로 시간이 경과하면서 감소하는 값을 나타내었다. 3. 뇌허혈을 유발한 뇌의 해마는 CA1 영역과 lateral habenular nucleus부위에서 흰색의 경색을 보였다. 4. 90분 간의 가역적 국소대뇌허혈에도 재관류후 24시간 후 내후각뇌피질 (entorhinal cortex), 큰집게 (forcep major), 뇌량(corpus callosum), 이차시각피질(secondary visual cortex)에서 DNA fragmentation을 확인할 수 있었다. 이상의 결과를 종합하면, 출생초기와 고령시의 Nip2의 증가는 뇌허혈에 대한 세포사멸의 감수성의 증가와 관련이 있을 것이라 추측되며, 뇌허혈유발시에 Nip2의 증가는 초기의 뇌세포의 아포토시스과정과 밀접한 관련이 있을 것이라 추측된다.
Nip2 mRNA expression of hippocampus was clarified in the postnatal, adult and aging rat. We observed the change of Nip2 mRNA expression in the ischemic rat hippocampus at 3, 6, 24 and 72 hours after reperfusion. And we investigated the relation between Nip2 and apoptosis after ischemic insults. The Rats were killed 2, 4, 7 days after birth and normal adult rats & aged rat were killed. Male F344 rats were subjected to transient middle cerebral artery occlusion. Reperfusion was achieved by withdrawing the filament after 90min minutes, and rats were sacrificed 3, 6, 24, 72 hours after reperfusion. Hippocampal sections were stained for TUNEL using ApopTag kit following the protocol provided by the manufacturer, and stained with 2, 3, 5-triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet We used quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction to characterise changes in the mRNA expression of Nip2 in the rat models of transient focal ischemia and postnatal, adult and aged rat. Nip2 mRNA expression were increased in the rat of postnatal development and aging more than these of adult. After reperfusion, marked increase of Nip2 mRNA was observed after 3 and 6 hours. After that time mRNA expression of Nip2 was decreased gradually. The TUNEL staining detected DNA fragmentation in neurons of the entorhinal cortex, forcep major corpus callosum and secondary visual cortex at 24 hours. And TTC staining results showed the whitish infact changes of hippocampal CA1 region and lateral habenular nucleus. We hypothesize that the overexpression of Nip2 is concerned with sensitivity to the ischemic insult at postnatal period and aging period. And, early apoptotic events after cerebral ischemic insults relate to Nip2 mRNA overexpression.
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