쥐의 간암 세포에서 Desferrioxamine에 의해 유도된 Hypoxia Inducible Factor-1α가 방사선 저항성을 초래함

The Expression of Hypoxia Inducible Factor-1α by Desferrioxamine Induces Radioresistance in Mouse Hepatoma Cell Line

목 적: 저산소증은 방사선 감수성을 현저히 감소시키며, 이에 대한 적응 반응에서 hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α)가 중요한 역할을 하고 있다. HIF-1α의 발현과 방사선 감수성과의 상관 관계를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 쥐의 간암 세포주인 hepa1c1c7 세포와 HIF-1β가 결손되어 HIF-1α의 기능이 억제된 hepa1C4 세포 를 사용했다. 저산소 유사 물질인 desferrioxamine (DFX)을 전처치하고 6시간 뒤에 방사선조사를 하여 western blot 으로 HIF-1α 발현을 조사하였다. Apoptosis는 DNA 분절화, propidium iodide 핵염색, 그리고 apoptotic cell death detection ELISA kit를 이용하였다. MTT assay법으로 방사선 감수성을 측정하고 SF2, SF8, 그리고 mean inactivation dose (MID)를 산출하여 통계적 분석을 하였다. 결 과: Hepa1c1c7 세포에서는 DFX 전처치를 한 경우 방사선에 의해 HIF-1α의 발현이 증가했으나, hepa1C4 세포주에서는 변화가 없었다. Hepa1C4 세포의 방사선 감수성은 DFX처리에 따른 영향이 없었으나 hepa1c1c7 세포의 방사선 감수성은 DFX를 전처치했을 때 유의하게 감소하였다. 결 론: 저산소 유사 물질인 DFX에 의해 유도된 HIF-1α가 쥐의 간암 세포주에서 apoptosis와 방사선 감수성을 감소시켰다. 이러한 결과는 종괴내의 저산소 세포에서 방사선에 의해 HIF-1α가 유도되고 이로 인해 저산소 세포에서 방사선 감수성을 저하시키는 것으로 생각되었다.

Purpose: It is well known that the radiosensitivity of tumor cells can be significantly reduced under hypoxic conditions. Hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) plays a pivotal role in the essential adaptive responses to hypoxia. Therefore this study investigated the relationship between HIF-1α expression and radiosensitivity. Materials and Methods: Mouse hepatoma cell line hepa1c1c7 and HIF-1β-deficient mutant cell line hepa1C4 were used to analyze the role of HIF-1α on radiosensitivity. These cells were exposed for 6 h to esferrioxamine (DFX) before radiation. HIF-1α expression was examined by Western blot. Apoptosis was assessed by DNA fragmentation, propidium iodide staining, and apoptotic cell death detection ELISA kit. Radiation sensitivity was determined using MTT assay. The radiobiological parameters, surviving fractions at 2 Gy and 8 Gy, and mean inactivation dose (MID) from the linear-quadratic model were used to assess radiation sensitivity in the statistical analyses. Results: The expression of HIF-1α was increased, whereas apoptosis was decreased, by radiation in the presence of DFX in hepa1c1c7, but not in hepa1C4. The radiosensitivity of hepa1C4 cells was not significantly affected by DFX treatment. The radiosensitivity of hepa1c1c7 cells was significantly decreased in the presence of DFX Conclusion: The expression of HIF-1α by hypoxia-mimic agent DFX reduced apoptosis and radiosensitivity in mouse hepatoma cell line hepa1c1c7. These results suggested that HIF-1α could be induced by irradiation in hypoxic cells of tumor masses, and that this might increase radioresistance in hypoxic cells.