분열효모 hos3+ gene의 클로닝, 발현 및 특징

분열 효모인 S. pombe의 Hos3는 high osmotic stress 하에서 성장이 필수적이라고 알려져 있다. Hos3를 암호화하는 구조적인 유전자를 분열 효모의 genomic DNA로부터 증폭시킨 후 shuttle vector pRS316에 삽입하여 재조합 plasmid pYFHOS3를 제작하였다. 클로닝한 hos3+ 유전자는 1,601 bp를 포함하는데, 10,380.8 Da의 분자량을 가진 94 amino acid sequence의 단백질을 암호화 할 것이다. Hos3의 아미노산 서열은 Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus flavus, Saccharomyces japonicus와 상당한 homology를 가진다. 클로닝한 DNA 서열은 또한 946 bp의 upstream region과 371 bp의 downstream region을 포함한다. pYFHOS3를 포함한 S. pombe KP1 cell은 nitric oxide (NO)를 생성하는 sodium nitroprusside (SNP)와 cadmium 포함하는 최소 배지에서 생존 능력이 증가하였다. 또한 질소의 결핍 배지에서도 세포의 생존 능력은 강화되었다. 37°C의 배양 조건에서도 pYFHOS3를 포함한 S. pombe KP1 cell의 생존 능력은 더 강화되었다. pYFHOS3를 포함한 S. pombe KP1 cell과 vector control cell의 total glutathione (GSH) 수준은 유사하게 나타났는데, GSH는 Hos3의 세포적인 기능에 영향을 주지 않는다고 생각된다. 종합적으로 Hos3는 oxidative/nitrosative stress, 질소 결핍, 높은 온도에 대하여 방어 기능을 한다.