열처리 및 트립신 첨가로 야기된 유청 단백질의 전기영동적 변화

Heat and Trypsin Induced Electrophoretic Changes of Bovine Whey Proteins

Holo-α-La 및 apo-α-La과 β-Lg의 혼합물 (1:1, w/w)을 85℃에서 10분간 가열한 후 37℃로 조정하여 10 분간 정치한 다음, trypsin을 첨가해서 0. 1. 4. 7. 10분간 각각 반응시킨 후 각 시료에 trypsin 저해제를 첨가하여 반응을 정지시킨 후 전기영동을 실시하여 그 반응 거동을 관찰하였다. 또한 β-Lg만을 85℃에서 10분간 가열한 후 holo-α-La 및 apo-α-La과 혼합물(1:1, w/w)을 만들어 위와 동일한 방법으로 처리하여 전기영동 양상을 조사하였다. 혼합물을 85℃에서 10분 간 가열한 다음에 trypsin이 첨가된 경우 분자량이 약 26.3 kDa 정도의 분해물이 나타났고 α-La 보다 작은 band도 생성됨을 관찰할 수 있었다. Trypsin 첨가 후 반응 시간에 따라 β-Lg의 band가 α-La 보다 더 많이 분해된 것으로 보이며 분자량이 약 26.3 kDa 정도의 분해물의 차이는 거의 보이지 않았다. Apo-α-La과 β-Lg 혼합물의 경우 분자량이 약 26.3 kDa 정도의 복합물이 일부 분해되어지는 정도는 holo-α-La의 경우보다 더 빨라서 반응 시간 10분이 정과하면 band의 대부분이 사라졌다. β-Lg만을 85℃에서 10분간 가열한 후 α-La과 혼합하여 처리한 경우 분자량이 약 26.3 kDa 및 21.5 kDa로 추정되는 복합물이 나타났고 α-La 보다 작은 band도 생성됨을 관찰할 수 있었다. 효소 첨가 후 반응 시간이 경과함에 따라 β-Lg이 apo-α-La에 비하여 손실이 컸으며 분자량이 약 26.3 kDa 및 21.5 kDa로 추정되는 복합물이 일부 분해되어지는 정도는 holo-α-La의 경우와 유사하였고 효소 반응 시간 10분이 경과하면 band의 대부분이 사라졌다. Holo-a-La 보다 열에 불안정한 apo-α-La과 β-Lg의 혼합물의 경우가 더 변화가 크게 나타남을 알 수 있었다. 이것은 이미 열처리를 실시하여 변성된 β-Lg을 apo-α-La과 혼합하였기 때문에 β-Lg이 apo-α-La에 거의 영향을 주지 못했고, 이로 인해 열에 불안정한 apo-α-La이 다시 열처리 되어 효소의 공격을 다 쉽게 받았기 때문인 것으로 사료된다.

In order to study the reaction behavior of the mixtures of bovine β-lactoglobulin (β-Lg) with holo-α-lactalbumin(α-La) and apo-α-lactalbumin during heat treatment, samples were heated at 85℃ for 10 min, added trypsin and trypsin inhibitor, and then they were analyzed using sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. In the other trial, the β-Lg was pre-heated at 85℃ for 10 min, mixed with α-La, heated at 85℃ for 10 min, and treated the same as above described. The electrophoretic pattern showed that the intensity of loss of β-Lg was higher than that of α-La with increasing reaction time. Loss rate of apo-α-La-β-Lg mixture was higher than that of holo-α-La-β-Lg mixture. When the mixture was heated and added trypsin, appeared some bands of about 26.3 kDa, and 14.0 kDa which is smaller than the α-La (14.2 kDa). When the β-Lg was pre-heated 85℃ for 10 min, mixed with α-La, and treated the same as other samples, appeared some bands of about 26.3 kDa. 21.5 kDa, and 14.0 kDa which is smaller than that of the α-La. The loss rate of the apo-α-La-β-Lg mixture was higher than that of holo-α-La-β-Lg mixture. It is assumed that the β-Lg was already denatured by pre-heating and influenced little on the apo-α-La, and therefore the apo-α-La-β-Lg mixture was more easily attacked by the enzyme.