섬유주세포에서 Rho Kinase 저해제가 일산화질소의 생성에 미치는 영향

Effect of Rho Kinase Inhibitor on the Production of Nitric Oxide in Trabecular Meshwork Cells

목적: 섬유주세포에서 Rho kinase (ROCK) 저해제가 일산화질소의 생성과 일산화질소합성효소(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)의 발현에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 대상과 방법: 사람의 섬유주세포를 일차배양한 후 ROCK 저해제인 Y-27632를 0 μM, 10 μM, 100 μM의 농도로 노출시킨 후 1일, 3일째에 Griess assay를 이용하여 일산화질소의 생성량을 측정하였다. 노출 1일째에 섬유주단층세포층의 투과도와 교원질 겔의 수축에 미치는 영향을 조사하였고, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)을 이용하여 eNOS mRNA의 발현 정도를 측정하였다. 결과: 10 μM, 100 μM 농도의 Y-27632는 24시간 노출 후 섬유주단층세포층의 투과도를 농도에 비례하여 유의하게 증가시켰으며(all p=0.001), 교원질 겔을 이완시켰다. 또한 Y-27632는 1일과 3일째 모두 일산화질소의 생성량을 증가시켰으며(각각 p=0.020, 0.001), eNOS mRNA의 발현도 함께 증가하였다(p=0.039). 결론: 섬유주세포에서 ROCK 저해제가 섬유주를 통한 방수유출을 증가시키는 기전에 있어서 일산화질소의 생성 증가가 관여할 것으로 생각된다.

Purpose: To investigate the effects of Rho kinase (ROCK) inhibitor on the production of nitric oxide (NO) and expression of endothelialnitric oxide synthase (eNOS) in cultured human trabecular meshwork cells (HTMC). Methods: Primarily cultured HTMC were exposed to 0 μM, 10 μM or 100 μM Y-27632 for 3 days and NO production was assessed using Griess assay. After 24 hours, the effect of Y-27632 on the contraction of collagen matrix and the permeability of the HTMC monolayer was determined. The expression of eNOS mRNA was assessed using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and cellular survival with the 3-(4, 5 -dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Results: In HTMC, 10 μM and 100 μM Y-27632 significantly increased NO production after 1 day and 3 days (p = 0.020 and 0.001, respectively). At 1 day after exposure, Y-276320 significantly relaxed the collagen matrix and increased the permeability of the HTMC monolayer (all p = 0.001) and the eNOS mRNA expression (p = 0.039). Conclusions: Increased NO production may play a role in the mechanism of increased trabecular outflow associated with ROCK inhibitor.