Expression and Purification of Recombinant Human Vascular Endothelial Growth Factor(rhVEGF165)

대장균 발현 시스템 (Escherichia coli expression system)을 이용한 단백질 생산 시 문제점으로 지적되어 왔던 내포체(inclusion body) 형성의 해결을 비롯하여 융합 파트너(fusion partner) 의 사용과 같은 분자생물학적으로 기술적인 진보 등을 토대로，혈관 생성에 관여하는 인간의 혈관내피세포성장인자(human vascular endothelial growth factor 165, hVEGF165)의 대량생산을 시도하였다. 효과적으로 선별 및 제작된 발현벡터에 합성된 hVEGF165 유전자를 클로닝하여 pET32a-hVEGF165 발현벡터로 형질전환된 E. coli 숙주세포에서 재조합 융합 단백질 TrxA-hVEGF165를 생산하였다. TrxA-hVEGF165는 30°C의 0.6 mM IPTG 농도에서 4시간 배양하여 최적으로 발현되었다. TrxA-hVEGFi165는 HisTrap FF crude column의 75~100mM imidazole 농도에서 효과적으로 분리되었으며，enterokinase 처리 후 HiTrap heparin HP column의 150-180mM NaCl 농도에서 재조합 단백질 hVEGFl165가 순수 분리되었다. 재조합 인간 혈관내피세포성장인 자 (recombinant human vascular endothelial growth factor 165，rhVEGF165)는 1L의 E. coli 배양액으로부터 94.1%의 순도로 3.2 mg 이 생산되었다.