Expression of the MPB70 protein of mycobacterium bovis and use in the serodiagnosis of bovine tuberculosis

MPB70항원은 우형결핵균(Mycobacterium bovis)의 주요 분비항원으로 우형결핵균에 특이하여 우결핵의 혈청진단에 응용성이 비교적 높은 것 중의 하나이다. 본 연구에서는 MPB70 단백질의 혈청진단 유용성 여부를 평가하기 위하여 유전자재조합 기법으로 Escherichia coli에서 MPB70 단백질을 생산하여 그 항원성을 조사하였다. 유전자은행에 등록된 MPB70유전자의 핵산염기서열을 근거로 primer를 준비하였으며, polymerase chain reaction cloning법으로 pQE-30 expression vector에 MPB70 유전자를 클론하여 E. coli에서 발현시켰다. 유전자재조합 (recombinant: r) MPB70 단백질은 25 kDa으로 Western blotting 분석에서 우결핵 양성반응우의 혈청과 반응하였으나 우결핵 음성우의 혈청과는 반응하지 않아 rMPB70 단백질의 항원성과 특이성을 확인하였다. 효소결합면역분석법(ELISA)을 이용하여 rMPB70 단백질에 대한 항체검사를 시행한 결과 우결핵 양성반응우 29두 가운데 26두 (89.7%)에서 양성기준 흡광도를 초과하였으며, 우결핵 음성우 30두 모두 음성반응을 나타냈다. 따라서 본 연구에서 생산하여 정제한 rMPB70 단백질항원을 이용한 ELISA검사법은 비교적 높은 민감도와 특이도를 나타내 추후 우결핵 진단의 보조검사로 이용될 수 있음을 제시하였다.