국내 서식 살모사 독의 독력과 항독소 표준화

Determination of venom toxicity and standardization of venom and antivenin of korean agkistrodon spp

한국산 살모사 교상치료를 위한 항사독을 제조하기 위해 국내에 서식하는 3종 살모사의 독을 채취하여 독력을 치사능과 출혈능으로 나누어 평가하였으며 이를 토대로 무독화한 살모사독소를 말에 접종하여 항사독을 생산하였다. 생산된 항사독은 현재 항사독의 국가 검정에 이용하고 있는 일본 국립감염증연구소의 표준 항사독과 표준독을 이용하여 역가를 설정하였다. 1. 국내에 서식하는 3종 살모사의 독을 시험한 결과 쇠살모사 독의 LD₅₀값은 8.68±0.8 ㎍으로 가장 높았으며 까치살모사가 10.28±1.2 ㎍, 살모사가 39.1±4.0 ㎍이었다. 또한 최소 치사량은 살모사와 까치살모사가 300 ㎍, 쇠살모사가 200 ㎍으로 치사능에 있어서는 쇠살모사의 독력이 가장 강하였으며 그 다음이 까치살모사, 살모사순이었다. 2. 출혈능의 경우 살모사가 2.31±1.09 ㎍이 최소 출혈량으로 나타났으며 까치살모사가 2.39±0.08 ㎍, 쇠살모사가 1.36±0.11 ㎍이 최소 출혈량으로 나타나 쇠살모사의 독이 강한 출혈능을 나타내었다. 3. 제조된 조항사독의 면역글로불린 함량은 27.7%로 약 17mg/ml이었으며 조항사독 53㎕가 A. brevicaudus venom 2 L>TEX>D₅₀(78.2㎍)까지 중화하였고 그 이상은 중화하지 못하였다. 항출혈능은 사독 150 MHD에 대하여 17 ㎕, 200 MHD에 대하여는 31 ㎕, 250 MHD에 대하여는 49㎕가 최소출혈가였다. 4. 정제된 살모사 항사독은 총 면역글로블린의 함량은 98.4%로 약 23.36 mg/ml이었다. 중화능을 보면 항출혈능의 경우 주사된 항사독 27 ㎕가 표준 출혈독 1 Td를 중화하는 1 MHD를 나타내는 값이며 항치사능의 경우 주사된 항사독 32.7 ㎕가 표준 치사독 0.1 Td를 중화하여 ED₅₀을 나타내는 값으로 나타났다. 면역독에 대하여는 정제항사독 약 35 ㎕가 112.8 ㎍ (2.9 LD₅₀)의 독을 중화하였다. 5. 국내 살모사독으로 제조하여 정제된 항사독은 항치사가가 330 unit/ml, 항출혈가가 1,500 unit/ml로 나타났다. 정해진 항사독의 역가를 이용하여 살모사독의 표준품을 제조하였는데 결정된 항사독량을 기준으로 살모사독 112.6 ㎍을 1치사 시험독소량을 정하였으며 10.7 ㎍을 1출혈 시험독소량으로 정하였다.

To develop antivenins for the treatment of snake bited-persons, venoms from three different species of Korean snakes, Agkistrodon saxatillis, A. ussuriensis and A. brevicaudus were evaluated for their lethal and hemorrhagic activities to be used as immunogens. With the resultant basal data, we produced the polyvalent antivenin from the horse which were immunized with the inactivated venoms. The antibody titer of the product were calculated by comparing the Japanese national reference antivenin and crude venom. The LD₅₀ value for the venom of A. ussuriensis was 8.68㎍ which was the highest toxic effect among the three Agkistrodon species. The LD₅₀ value of A. saxatillis and A. brevicaudus were 10.28㎍ and 45.8㎍, respectively. The minimum lethal dose(MLD) of A. brevicaudus and A. saxatillis was 300㎍ and that A. ussuriensis was 200㎍. Lethal activities were found to be much higher in the crude venom of A. ussuriensis, followed by A. saxatillis and A. brevicaudus. A. ussuriensis showed the most strong hemorrhagic activity of 1.36㎍ of minimum hemorrhagic dose (MHD), and those of A. brevicaudus and A. saxatillis were 2.3㎍ and 2.39㎍, repectively. The content of immunoglobulin of the prepared crude antivenin was approximately 17mg/ml (27.7%). The dose of 53㎕ of the antivenin had ability to neutralize lethal activity against less than 2 LD₅₀ (72.4㎍) of A. brevicaudus venom. In the inhibiting hemorrhagic activity, each dose of 17㎕, 32㎕ and 49r㎕ of antivenins showed minimum hemorrhagic effect dose against 150 MHD, 200 MHD and 250MHD of the snake venom, repectively. The purified polyvalent antivenin contained 98.4% of total immunoglobulin (23.36mg/ml). The anti-lethal and antihemorrhagic value of the final polyvalent antivenin product were calculated as 330 unit/ml and 1,500 unit/ml. From the above results, 1 lethal experimental dosage was determined as 112.6㎍ of the crude venom and 1 hemorrhage experimental dosage was determined as 10.7㎍ of venom.