Duplex PCR for simultaneous detection of lawsonia intracellularis and salmonella in swine

Duplex PCR을 이용한 돼지 lawonia intracellularis 및 salmonella균 동시진단법 확립

돼지 회장염 및 살모넬라성 장염은 주로 비육돈에서 문제시 되는 소화기 질병으로 양돈농가에 미치는 경제적 피해는 심각한 실정이다. 이들 질병을 진단하는데는 통상적으로 며칠이 소요되고, 특히 증식성 장염의 원인균인 Lawsonia intracellularis는 일반배지에서 자라지 않아 임상증상 및 병리조직학적 소견에 의존하여 진단하고 있는 실정이며 세포 배양을 통해서만 원인균을 분리할 수가 있다. 본 실험에서는 L.intracellularis 및 Salmonella typhimurium에 대한 특이 primer를 제작, 합성하여 duplex PCR을 통한 동시 감별 진단법을 확립하였으며, 이에 대한 민감성 및 특이성을 검사하였다. 각각 또는 혼합된 DNA에서 두 원인체에 대한 특이적인 200-bp, 300-bp의 PCR 산물을 확인하였고 12종의 Salmonella 혈청형에 대해서도 같은 크기의 band를 볼 수 있었으며 L. intracellularis 및 S. typhimurium에서 각각 100 pg까지 검출 가능하였다. 또한 PCR 증폭산물에 대한 염기서열을 분석한 결과, 각 원인체의 GenBank 염기서열과 일치하였다. 따라서 본 실험에서 확립한 duplex PCR은 이들 두 질병을 신속하게 진단할 수 있으며 정기적인 surveillance program에 활용될 수 있음을 제시하였다.