실시간 활성시스템을 접목한 감초의 유효성분에 대한 표준화 연구

Studies on Standardization of Licorice Based on Its Active Components with On-line HPLC Bioassay System

기존의 HPLC 분석법에 활성을 접목시킨 실시간 분석법을활용한 새로운 표준화 방법을 시도하였다. 항산화, 항염증, 항암작용을 포함한 다양한 생리 활성을 가지고 있는 한약재인 감초를 대상으로 산지가 다른 아홉 종류의 감초 추출물을 시료로하여 분석을 실시한 결과 영주산 감초에서 라디칼 소거능이 가장 우수하게 나타났으며 실시간 활성 측정법에 의해 세 개의 활성 peak가 확인되었다. 이를 대상으로 크로마토그래피를 실시하여 세 개의 활성 피크의 물질을 각각 dehydroglyasperin C,dehydroglyasperin D, isoangustone A로 동정하였으며 감초의 항산화 지표 성분으로 설정하였다. 실시간 활성 분석법에 대한 validation을 수행한 결과 다른 물질과의 간섭이 없는 특이성, 상관계수 0.99~1.00의 직선성, 일내와 일간 정밀도의 RSD값이 2% 이내의 정밀성 갖으며, 회수율 98~100%의 정확성을보여 이 분석방법에 대한 신뢰도와 재현성이 검증되었다. 특히,실시간 활성측정법은 활성 물질의 정성 및 정량분석을 동시에측정할 수 있어 빠른 시간내 효과적으로 시료를 비교 분석할 수있는 장점을 가지고 있다. 결과적으로 ABTS를 이용한 라디칼소거능을 접목시킨 실시간 활성 분석법은 활성을 기반으로 한천연물 소재의 표준화 연구 접근법 중의 하나로 유용하게 사용될 것으로 기대된다.

In an attempt to evaluate licorice quality based on its biological activity, we grafted an on-line high-performance liquid chromatography (HPLC) bioassay method into the previously established HPLC analysis method. The common antioxidant peaks in licorices of various origin were observed through an on-line HPLC/DPPH system leading to a decrease in absorbance at 517 ㎚ for 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Among them, the licorice from Youngju possessed the highest activity. Therefore, three active standard compounds from the dehydroglyasperin C, dehydroglyasperin D, and isoangustone A, were isolated and elucidated by medium pressure liquid chromatography (MPLC) and instrumental analysis such as nuclear magnetic resonance (NMR), respectively. On-line HPLC/ABTS analysis method with the simultaneous determination of three standard compounds and their radical scavenging activity was established for the quality evaluation of licorices. 2,2 -azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid radicals (ABTS ᠂ ) which is stable and effective was used in replace of DPPH. The radical scavenging activity of three standards is compared with that of Trolox, known as antioxidant, showing a negative peak with a decrease in absorbance at 734 ㎚ for ABTS. This on-line HPLC/ABTS analysis method was validated for specificity, linearity, precision and accuracy in compliance with international conference on harmonization (ICH) guideline.