Cloning, Purification, Crystallization and X-ray diffraction analysis of BMH2 from Saccharomyces cerevisiae

효모 Saccharomyces cerevisiae는 각각 14-3-3 단백질 인 ScBMH1과 ScBMH2를 암호화하는 두 개의 유전자를 가지고 있다. 이 효모에서 14-3-3 단백질은 대부분의 실험실 균주에 필수적이다. 고등 진핵 생물과 마찬가지로 효모 14-3-3 단백질은 다양한 세포 과정에 관여하는 수많은 단백질과 결합한다. 14-3-3 단백질의 높은 진화 보존성을 감안할 때, 실험 접근성과 효모의 상대적 단순성으로 인해 14-3-3 단백질 군의 기능을 밝히는 우수한 모델 유기체가 된다. ScBMH2의 구조 기능 관계를 연구하기 위한 효모 ScBMH2가 성공적으로 결정화되었고 회절 데이터가 3.0 Å 해상도로 수집되었다. 결정은 orthorhombic space group P21212에 속하며 셀 매개변수 a = 155.547, b = 117.896, c = 74.435Å 및 α = β = γ = 90 °에 속한다. 또한 Matthews 계수 2.75 Å3Da-1, 용매 함량 55.22%, 비대칭 단위 2 분자에 해당한다. ScBMH2의 심층 구조 분석이 현재 진행 중이다.

The yeast Saccharomyces cerevisiae (Sc) has two genes encoding 14-3-3 proteins, ScBMH1 and ScBMH2, respectively. As in higher eukaryotes, yeast 14-3-3 proteins bind to numerous proteins involved in a variety of cellular processes such as protein C kinase or several monooxygenases. Given the high evolutionary conservation of the 14-3-3 proteins, the experimental accessibility and relative simplicity of yeasts make them excellent model organisms for elucidating the function of the 14-3-3 protein family. In order to study structure function relationship of ScBMH2, yeast ScBMH2 has been successfully crystallized and a diffraction data has been collected to ~3.0Å resolution. The crystal belongs to the orthorhombic space group P21212, with cell parameters a = 155.547, b = 117.896, c = 74.435 Å and α=β=γ=90°. For the determining the exact spacegroup, we tried the molecular replacement by Phaser program with several possible orthorhombic spacegroup. The solution data have shown the clear rotation and translation function at P21212. The crystals correspond to 2.75Å3Da-1 of Matthews coefficient, 55.2% solvent content and two molecules in an asymmetric unit. Determination and deeply structural analysis of the ScBMH2 are currently in progress.