싸이클로스포린 A가 섬유주세포의 산화스트레스와 섬유주 유출에 미치는 영향

Effect of Cyclosporine A on Oxidative Stress in Trabecular Meshwork Cells and Trabecular Outflow

목적: 싸이클로스포린 A (cyclosporine A, CSA)가 섬유주세포의 산화스트레스와 섬유주 유출에 미치는 영향과 안압에 미치는 영향을알아보고자 하였다. 대상과 방법: 인체 섬유주세포를 1, 10 μM CSA에 24시간 노출시킨 다음 MTT assay로 세포의 생존을, Griess assay로 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생성을 측정하였다. eNOS의 활성을 Western blot으로 측정하였고, DCFH-DA assay와 modified cytochrome c assay로 산화스트레스에 미치는 영향을 조사하였다. 섬유주단층세포층의 방수유출에 미치는 영향을 Trans-epithelial endothelial resistance (TEER)로 측정하였다. 건성안으로 진단받고 CSA를 사용한 녹내장 환자 18명을 대상으로 안압의 변화를 조사하였다. 결과: 10 μM CSA는 섬유주세포의 생존과 NO의 생성을 감소시켰다. CSA는 eNOS의 활성을 저하시켰다. CSA는 산화스트레스를 증가시켰으나 superoxide의 생성에는 영향을 미치지 않았다. 10 μM CSA는 섬유주단층세포층의 저항을 증가시켰다. 또한, CSA 점안제를6개월 이상 사용한 녹내장 환자들에서 유의한 안압의 변화를 나타내지 않았다(p=0.365). 결론: CSA는 NO의 생성과 eNOS의 활성을 저하시켰으며 산화스트레스를 유발하였으며 섬유주의 투과도를 감소시켰다. 건성안을 가진 녹내장 환자에서 국소 CSA는 안압에 유의한 영향을 미치지 않았다. 따라서 임상적으로 CSA의 국소적 사용이 섬유주의 유출과안압에 미치는 영향은 적을 것으로 생각된다.

Purpose: This study investigated the effects of cyclosporine A (CSA) on oxidative stress and trabecular outflow in human trabecular meshwork cells (HTMCs). Additionally, its impact on intraocular pressure (IOP) was evaluated. Methods: HTMCs were exposed to 1.0 μM and 10 μM of CSA for 24 hours. Cell viability and nitric oxide (NO) production were assessed using the MTT assay and Griess assay, respectively. Reactive oxygen species (ROS) generation and superoxide production were measured using the DCFH-DA assay and a modified cytochrome C assay. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) protein expression was analyzed through Western blotting, while HTMC monolayer permeability was evaluated using trans-epithelial endothelial resistance (TEER) measurements. IOP changes were assessed in 18 glaucoma patients who had used topical CSA for dry eye disease over 6 months. Results: Treatment with 10 μM of CSA reduced cell viability and NO production. CSA also decreased eNOS protein activity and ROS generation without affecting superoxide production. Additionally, 10 μM of CSA increased TEER, indicating decreased permeability of the HTMC monolayer. However, IOP changes in patients using topical CSA were not statistically significant (p = 0.365) over the 6-month period. Conclusions: CSA reduced NO production and eNOS protein activity while increasing oxidative stress in HTMCs. It also decreased HTMC monolayer permeability. However, topical CSA did not significantly alter IOP in glaucoma patients.