pUC8 플라스미드 운반체에 핵다면체 바이러스 DNA절편(일부 Pst 1 Genome)의 클로닝

Cloning of the Nuclear Polyhedrosis Virus DNA Fragments (Partial Pst 1 Genome) to Plasmid Vector pUCS

핵다면체 바이러스(Baculovirus, Nuclear Polyhedrosis Virus) 게놈 DNA는 조직배양 세포에 바이러스를 감염시켜 분리하였으며, 분자량은 약 127.6kb였다. BNPV DNA 게놈을 제한효소 Pst I으로 절단한 후 그들의 일부절편을 pUC8 플라스미드 운반체에 클로닝하여, E. coli JM83세포에 형질전환하였다. BNPV DNA 게놈을 Pst I 효소로 저단했을 때 16개의 절편으로 분리되었으며, 분자량범위는 1.01에서 25.06kb 사이였다. 그 중 6개의 Pst I 절편 DNA을 클로닝하고 다시 Pst I 효소로 절단하여 아가로스 겔 전기영동을 통하여 확인하였다. 이 결과로 viral DNA 게놈의 gene library는 약 37.5%였다. 또한 바이러스 DNA 절편이 클로닝된 형질전환체와 E. coli JM83 균주를 SDS-polyacrylamide gel 전기영동하였다. 이들 결과들은 단백질 밴드의 pattern에 있어서 어떤 차이점도 나타나지 않았다.

The complete genome of Baculovirus (Nuclear Polyhedrosis Virus, BNPV), which was isolated from tissue culture cells infected with the virus, was digested with Pst I endonuclease and cloned in E. coli JM83 using the plasmid vector pUC8. The molecular weight of genome DNA of BNPV is 127.6kb. BNPV genome DNA digested by the Pst I enzyme was divided into 16 fragment, with the molecular sizes ranging from 1.01 to 25.06kilobases. Six Pst I DNA fragments were cloned and identified by digestion of the recombinant DNAs with Pst I enzyme by comparison of their electrophoretic mobilities in agarose gel. The gene library was showed about 37.5% of the viral genome. The total cell polypeptides of the all transformants and E. coli JM83 were analyzed on the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. These results didn't show any significient differences in protein band patterns.