Aspergillus nidulans mtDNA의 자가복제절편

Autonomously Mitochondrial Replicating Sequence of Aspergillus nidulans

Aspergillus nidulans 의 DNA 로부터 Saccharomyces cerevisiae에서 스스로 복제가능하고, 형질전환율도 삽입벡터에 비해 10\sup 4\ 배정도 높여주는 절편을 분리한 바 있다. A. nidulans에서 ANRI 의 일부를 포함한 pILJ16-4.5는 삽입벡터인 pILJ16보다 170배 정도 높은 형질전환 효율을 보였으며, S.cerevisiae와 마찬가지로 plasmid 상태로 회수가능했다. A.nidulans 페소내에서 2-3 copy 정도로 염색체와는 별개로 존재하는 것으로 나타났으며, 재형질전환능력도 있었다. ANRI은 미토콘드리아의 DNA에서 유래한 절편으로 밝고, ARS 공통절편과 유사한 절편도 11곳에 존재한다. $\Phi$X174와 SV40 DNA에서 gyrase 가 결합하는 부위의 공통편인 YRTGNYNNY도 6곳에 존재하며, ColE1에서 gyrase가 결합하는 b site와 일치하는 절편도 하나 포함하고 있으며, ABF1 결합 부위이 공통절편과 유사한 절푠$TCN_7ACG$ 도 하나 포함하고 있다. 이를 토대로 ANRI은 A.nidulans의 형질전환 후 회수가 가능한 replicating vector 개발에 이용할 수 있다.

We isolated the ANRI fragment from Aspergillus nidulons that could autononlously replicate and enhance transformation efficiency about $10^4$ fold compared lo the integrative vector in Saccha,omgcer cerevisioe. In A. nidulans recombinant plasmid pLJ16-4.5 which carries the 4.5 kb EcoRI fragment of ANRI showed a 170-[old increase of transformation efficiency compared to the integrative vector pLJ16 and could be recovered from iransfonnants as an intact form. Estimated copy number of transforming plasmid pLJ16-4.5 was scored as 2 to 3 copies in transformed A. nidulans. Recoinbinant plasinid pILJ16-4.5 is inilotically unstable; being lost Irom 65% of aswual progeny of transformants on selective medium and 90% on complete medium. Southern analysis of transformant DNA showed that the pILJ16-4.5 is maintained in free form. The sequencing data showed that ANRl fragment was originated from mitochondiral DNA of A. nid~ilans and contained high AT content as much as 74.7%. One ARS consensus sequence (A/T)TTr4T(A/G)TTT(AiT). I I ARS-like sequence (agreement 10 of 11) and ABFl binding core consensus sequence (TCN7ACG). Also six gyrase binding core consensus sequence (YRTGNYNNY: y=C or T, R=A or G, N=A, G, C or T) of $\Phi$X174 and SV40 DNA and one b site (CACTTTACC) combining with gyrase in ColEl are shown. ANRl can be developed as a repl&ng plasinid for lransfoimation system in A. nirlulmis.