밤나무 잎의 항미생물 효과 및 활성물질

Active Compounds and Antimicrobial Effects from Castanea crenata Leaf

밤나무 잎에 함유된 기능성 물질 검색의 일환으로 항미생물 효과를 검정하고 활성물질의 분석을 시도하였다. 예비실험을 통해 추출물의 활성을 확인한 후 시료를 n-hexane, EtOAc, MeOH로 순차 추출하여 정제한 다음 활성이 강한 MeOH 분획의 0.2 g, 0.5 g에 해당하는 추출물로 13종의 미생물에 대해 활성을 측정한 결과, Cram 양성 세균 중에서 S. aureus와 S. epidermidis는 대조구로 사용한 benzoic acid보다 강한 활성이 나타났고, M. luteus와 L. mesenteroides, B. subtilis에서도 활성이 인정되었으며, Gram 음성 세균인 E. coli, S. typhimurium, P. aeruginosa에서도 강한 활성이 나타나 밤나무 잎 추출물은 비교적 넓은 항균 spectra와 활성이 있음이 확인되었다. 이에 활성물질을 규명하고자 시료를 solvent fractionation, silica gel adsorption column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, HPLC 등으로 정제하고 활성이 나타난 산성 획분과 페놀성 획분의 물질을 분리한 후 MS, $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$ 등으로 분석한 결과, 산성 획분에서는 stigmast- 5-en-3-ol($\beta$-sitosterol)이 활성을 갖는 물질로 나타났다.

Antimicrobial effects of the extracts from Castanea crenata leaf were investigated. The antimicrobial effects of methanol extract (8 mg, 20 mg) of 0.2 g and 0.5 g. eq. of Castanea crenata leaf was stronger than that of 0.65 mg of benzoic acid against Gram(+) bacteria such as Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus, Leuconostoc mesenteroides and Bacillus subtilig and Gram(-) bacteria such as Escherichia coli, Salmonella typhimurium, and Pseudomonas aeruginosa. Growth inhibition of various microorganisms was observed in Castanea crenata leaf, therefor the Castanea crenata leaf were solvent fractionated. The ethyl acetate-soluble acidic and phenolic fraction were showed remarkable antimicrobial activity against microorganisms tested. The acidic fraction was purified with silica gel adsorption column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography and HPLC, subsequantly. The antimicrobial active substance isolated from the acid fraction of Castanea crenata leaf was characterized as stigmast-5-en-3-ol($\beta$-sitosterol) by MS and NMR analysis.