Molecular Cloning, Expression Analysis and Enzymatic Characterization of Elastase-like Serine Protease from the Olive Flounder (Paralichthys olivaceus)

넙치 (Paralichthys olivaceus)로부터 elastase-like serine protease (PoElSp)를 암호화하는 cDNA를 클로닝하여 그 서열을 분석한 결과, PoElSp 유전자는 269 아미노산을 암호화하는 978염기쌍으로 구성되었다. PoElSp 유전자의 조직 특이적 발현 양상을 RT-PCR법으로 조사한 결과, 간, 비장 및 소장에서 그 발현이 크게 나타났다. lipopolysaccharide (LPS)로 인위적 세균감염을 유도한 후, 1시간째에 콩팥에서, 3시간째에는 근육에서, PoElSp 유전자의 발현이 크게 증가하였다. 또한, 이 유전자의 발현은 비장에서 LPS 주입 후 1-24시간동안 점차로 증가하였다. pro-mature PoElSp (proPoElSp)에 해당하는 cDNA를 pET32a 벡터 시스템을 이용하여 대장균에서 발현시켰다. 이 재조합 proPoElSp 단백질의 활성은 gelatin zymography 방법과 합성형광 Z-Phe-Arg-AMC의 분해법을 이용하여 측정하였다. 단백질 분해효소 활성을 위한 최적 pH는 7.5였다. 실험결과들을 종합하면, PoElSp 단백질은 면역 반응에서 중추적 역할을 하리라 판단된다.