플라스미드에 존재하는 lactobacillus casei의 phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidases 유전자

Phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase gene located on plasmid in lactobacillus casei

Lactobacillus casei SW-M1으로부터 lactose 이용 pPLac Plasmid를 분리하였다. 이 plasmid에 lactose이용 유전자가 존재하는지를 확이하기 위하여 plasmid curing을 실시한 결과, acriflavin 8mg/ml 과 11 mg/ml EtBr를 처리한 후 , 3차 접종 배양의 경우에 curing 빈도가 가장 높았다. Lac와 plasmid가 cured 된 <TEX>$Lac^{+}$</TEX>strain의 당 이용능을 조사한 결고, glucose lactosidasedldydsmd은 불변이나, lactosedldydsmd만이 <TEX>$Lac^{+}$</TEX>strain에서 감소하였다 pPLac plasmid의 lactose 분해능은 <TEX>$eta$</TEX>-galactosidase 에 의한 것이 아니고, phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase 에 의한 것으로 확인되었다. <TEX>$Lac^{+}$</TEX>strain의 carbohydrate가 막투과시 PTS과 관련이 있는가를 조사한 결과ㅏ lactose-PTS가 가장 활성이 높았으며, 그 다음이 galactose-PTS, glucose-PTS 로 나타났다. 그러므로 lactose는 lactose-PTS(lactose-phosphotransferase system)에 의하여 glucose와 galactose-6-phosphate로 분해됨을 알 수 있었다. Phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase의 induction 실험에서는 galactoserk 가장 높은 induction 효과를 보여 주었으며, lactose와 glucose는 높은 수준의 induction을 나타내었으며, IPTG는 induction 효과가 없었다. Glucosedh lactose 배지에서 L. casie는 diauxic growth나 phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase합성을 조사한 결과, catabolite repression을 받지 않는 것으로 나타났다.

Plasmid DNA was isolated from Lactobacillus casei SW-M1(<TEX>$Lac^{+}$</TEX>strain). The curing frequencies of pPLac plasmid from L. casei SW-M1 showed 43% for acriflavin treatment and 53% for ethidium bromide treatment after 3 times transfer. On the charaterization of pPLac plasmid, it was found that the plasmid contained gene encoding phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase for lactose utilization. Lactose-PTS(phosphotransferase system)was involved in membrane transport system in <TEX>$Lac^{+}$</TEX> strain. Induction of phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase was specially effective by galactose, lower effect with lactose and glucose but not by IPTG(isopropyl-<TEX>$eta$</TEX>-D-thiogalactoside). This result showed that induction of phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase by IPTG did not appeared. The catabolite repression of phospho-<TEX>$eta$</TEX>-galactosidase synthesis by glucose was not found in L. casei.