무측지성 국화 형질전환 계통 영양번식 제2세대의 형태적 및 분자생물학적 특성

Phenotypic and molecular characteristics of second clone (T0V2) plants of the LeLs-antisense gene-transgenic chrysanthemum line exhibiting non-branching

환경위해성평가 연구 대상인 형질전환 이벤트로서의 자격을 확인하고자 형질전환세대(T0V0)에서와 같이 영양번식 제1세대(T0V1)에서도 도입유전자 LeLs-antisense의 발현 특성인 무측지성을 유지한 국화 무측지성 형질전환 계통 LeLs80의 영양번식 제2세대(T0V2)의 형태적 및 분자 생물학적 특성을 조사하였다. LeLs80 계통의 T0V2에서도 LeLs-antisense 유전자의 발현 특성인 무측지성이 안정적으로 유지되는 것을 확인하였다. 또한, Southern 및 Northern 분석에 의해 LeLs-antisense 유전자가 3 copy 도입되었으며, LeLs-antisense 유전자의 전사체가 정상적으로 발현되는 것도 확인할 수 있었다. 또한 flanking T-DNA sequencing method를 이용하여 LeLs-antisense 유전자의 주변 염기서열 분석 통해 LeLs80 계통의 genome내 LeLs-antisense 유전자 주변에 186 ~ 464 bp의 pCAMBIA2300 T-DNA right border 부근으로 추정되는 염기서열이 확인되었고, pCAMBIA2300전 염기서열과의 비교 분석한 결과, pCAMBIA2300 T-DNA left border와 right border내 선발마커 유전자 NPTⅡ의 발현 promoter 부분과 LeLs-antisense 유전자 발현 terminator 일부 염기서열과 일치하였다.

This study examined the phenotypic and molecular characteristics of the 2nd clone (T0V2) plants of LeLs-antisense gene-transgenic chrysanthemum line (LeLs80) that exhibited non-branching, proving the relevance of these characteristics as a factor for use in environmental risk assessment. Results of the Southern blot analysis showed that three copies of the LeLs-antisense gene were introduced into the transgenic line, and northern analysis showed that the transcripted gene was normally expressed in the transgenic line. A flanking T-DNA sequencing method was used to determine that sequences of 184 and 464 bps flanked the LeLs-antisense gene in the transgenic line. These sequences, respectively, matched the 35S promoter for expression of the nptⅡ gene and the NOS terminator for expression of the LeLs-antisense gene within the pCAMBIA 2300 vector.